Перейти к:
Диагностическое значение высокоэффективной жидкостной хроматографии кортикостероидов при заболеваниях гипофизарно-надпочечниковой системы
Аннотация
Доя оценки диагностического значения ВЭЖХ кортикостероидов в биологических жидкостях исследование проведено у 191 человека с различными опухолями коры надпочечников. По данным ВЭЖХ кортикостероидов в биологических жидкостях установлены признаки гормональной активности инциденталом, органического эндогенного гиперкортицизма и зло-качественности образования. Участи больных (15,5%) с инциденталомами коры надпочечников выявлены нарушения сте-роидогенеза, характерные для дефекта 11β-ОН- или 17-ОН-гидроксилазы. Полученные данные позволяют диагностировать нарушения в надпочечниках на ранних этапах заболевания и определять показания к оперативному лечению.
Ключевые слова
Для цитирования:
Великанова Л.И., Шафигуллина З.Р., Ворохобина Н.В., Сильницкий П.А., Бессонова Е.А. Диагностическое значение высокоэффективной жидкостной хроматографии кортикостероидов при заболеваниях гипофизарно-надпочечниковой системы. Проблемы Эндокринологии. 2005;51(6):9-11.
For citation:
Velikanova L.I., Shafigullina Z.R., Vorokhobina N.V., Silnitsky P.A., Bessonova Ye.A. Diagnostic value of high performance liquid chromatography of corticosteroids in diseases of the pituitary system. Problems of Endocrinology. 2005;51(6):9-11. (In Russ.)
Заболевания, протекающие с нарушением функции гипофизарно-надпочечниковой системы, всегда привлекали пристальное внимание эндокринологов ввиду сложности их диагностики и лечения [2]. В последние годы в связи с развитием современных технологий и диагностических возможностей отмечается значительный рост числа больных с патологией надпочечников, в том числе со случайно выявленными новообразованиями или так называемыми инциденталомами надпочечников [4]. Несмотря на достигнутые успехи в этой области, эндокринологи часто сталкиваются с трудностями в ранней и дифференциальной диагностике эндогенного гиперкортицизма, различных опухолей надпочечников, стертых форм врожденной гиперплазии коры надпочечников (ВГКН). С помощью чувствительных и экспресс-методов иммуноферментного и радиоиммунного анализа не всегда можно решить эти проблемы. Высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ) дает возможность определять различные стероидные профили крови и мочи, являющиеся наиболее ценными диагностическими тестами заболеваний, связанных с нарушением синтеза и метаболизма стероидных гормонов [11, 14]. Большинство исследований по диагностике заболеваний коры надпочечников посвящено определению уровня кортизола (F) и его метаболитов в моче методом ВЭЖХ- масс-спектрометрии [12, 13] или методом ВЭЖХ- РИА [10]. Безусловный научно-практический интерес имеют разработка методов количественного определения и качественных характеристик индивидуальных кортикостероидов и оценка их дифференциально-диагностической значимости.
Материалы и методы
Обследован 191 больной в возрасте от 25 до 75 лет (средний возраст 49,5 ±1,21 года) с опухолями коры надпочечников: 131 — с инциденталомами, 24 — с синдромом Иценко—Кушинга (СИК) гипофизарного генеза (СИК-ГГ), 16 — с СИК надпочечникового генеза (СИК-НГ) и 16 — со злокачественными опухолями коры надпочечников без клинических проявлений гормональной активности. Контрольную группу составили 25 практически здоровых людей (табл. 1). Среди больных с инциденталомами коры надпочечников преобладали женщины (69,6%), из них большинство (67%) в возрасте 50—60 лет. Диагноз СИК ставили на основании совокупности клинико-анамнестических данных, показателей биохимических, гормональных исследований, методов лучевой диагностики. У части больных диагноз был подтвержден результатами гистологического исследования удаленных опухолей. У всех больных с инциденталомами опухоль была выявлена случайно при проведении ультразвукового исследования или компьютерной томографии органов брюшной полости, предпринятых по поводу других заболеваний.
Таблица 1. Распределение больных по возрасту и полу
Группа обследованных |
Число обследованных |
Возраст, годы (медиана 25; 75)* |
|
женщины |
мужчины |
||
Контрольная |
20 |
5 |
29 (18; 44) |
Инциденталомы (группа А) |
48 |
31 |
53 (47; 60) |
Инциденталомы (группа Б) |
19 |
2 |
42 (40; 46) |
СИК (субклиническая форма) |
27 |
8 |
56 (52,5; 63,5) |
сик-гг |
17 |
7 |
47 (42; 55) |
сик-нг |
12 |
4 |
40 (33; 44) |
Аденокарциномы |
И |
5 |
49 (41; 58) |
Примечание. * — 25-й и 75-й перцентили.
Для изучения особенностей стероидогенеза кортикостероидов и метаболизма F у больных с различными заболеваниями коры надпочечников мы оптимизировали условия жидкостной экстракции количественного определения уровней F, кортизона (Е), кортикостерона (В), 11-дезоксикортикостерона (DOC), 11-дезоксикортизола (S) в сыворотке крови, а также экскреции свободного F (FF) и свободного Е (FE) с мочой методом микроколоночной обращенно-фазовой ВЭЖХ [1].
Условия хроматографирования были следующими: хроматограф жидкостный (Чехия), насос НРР 4001, УФ-детектор LCD 2563 (X = 254 нм), колонка Kromasil С-18 150 мм, 5 мкм, изократиче- ский режим элюирования, подвижная фаза 30 и 45% ацетонитрил—вода CH3CN-H2O (1-я часть — 26:74 v/v, 2-я часть — 41:59 v/v), скорость элюента 0,3 мл/мин. Для улучшения разделения стероидов, имеющих близкие времена удерживания, применяли p-циклодекстрин. Предел обнаружения 1—2 нг/мл. Для анализа брали 1 мл сыворотки крови и 2 мл мочи.
Для оценки функционального состояния системы гипофиз—кора надпочечников выполняли функциональные пробы на подавление с 2 и 8 мг дексаметазона в сутки, определяли содержание F и АКТГ в 8 и 20 ч [3]. Топическую диагностику опухолей проводили с использованием методов ультразвукового исследования, компьютерной томографии и магнитно-резонансной томографии надпочечников и области турецкого седла.
Полученные данные обработаны с помощью пакета программ Statistica (версия 5.11) с использованием комплекса непараметрических критериев.
Результаты и их обсуждение
При исследовании функции коры надпочечников с помощью традиционных методов анализа у 74,1% больных с инциденталомами уровни F крови, коэффициенты ритма секреции F и подавления F в пробе с 2 мг дексаметазона находились в пределах колебаний соответствующих показателей в контрольной группе (табл. 2). У 25,9% больных с инциденталомами отмечены нарушения регуляции гипофизарно-надпочечниковой системы. Увеличение коэффициента ритма секреции > 50 выявлено у 11 человек, увеличение коэффициента подавления > 50 — у 15, у 19 больных отмечен уровень АКТГ < 10 пг/мл, что позволило предположить у них субклинический СИК (см. табл. 2). Указанные изменения могут быть обусловлены автономной секрецией F узловым образованием, при этом скорость секреции F недостаточно высока для развития клинических проявлений, но значима для подавления некоторых звеньев оси гипофиз—кора надпочечников [6].
При анализе данных ВЭЖХ у больных с инциденталомами без нарушения регуляции гипофизарно-надпочечниковой системы мы обратили внимание на неоднородность стероидных профилей сыворотки крови и мочи.У большинства больных с инциденталомами (58,6%; группа А) установлены увеличение экскреции FF с мочой до 32,56 ± 5,01 мкг/с (р < 0,02) по сравнению с контрольной группой, увеличение уровня S в сыворотке крови и соотношений F/Е крови и FF/FE мочи (табл. 3), а также качественные изменения стероидного профиля, что может указывать на гормональную активность данных опухолей.
У 15,5% больных с инциденталомами (группа Б) отмечено снижение уровня экскреции FF с мочой до 5,97 ± 0,95 мкг/с (р < 0,05) и соотношения FF/FE мочи до 0,23 ± 0,01 (р < 0,02) при увеличении предшественников стероидогенеза DOC и S. У 85% больных этой группы найдены качественные изменения стероидного профиля, характерные для больных с ВГКН, установленные нами в предыдущих исследованиях. Эти данные дают возможность предположить наличие дефекта ферментов биосинтеза кортикостероидов в самой опухоли или наличие стертых форм ВГКН у данных больных с дефектом 11р-ОН- или 17а-гидроксилазы [8].
Таблица 2. Показатели ритма секреции и подавления F при проведении пробы с 2 мг дексаметазона у больных с опухолями коры надпочечников (М ± т)
Группа обследованных |
Fy, нмоль/л |
F„ нмоль/л |
(F/Fy) • 100% |
(F,/Fy) • 100% |
Контрольная (л = 25) |
391,9 ± 16,8 |
134,5 ± 11,9 |
30,9 ± 2,2 |
14,0 ± 1,1 |
Инциденталомы (л = 100) |
433,3 ± 20,4 |
169,2 ± 13,5 |
40,9 ± 3,38 |
16,9 ± 2,7 |
Р |
0,19 |
0,25 |
0,10 |
0,57 |
СИК (субклиническая форма) (л = 45) |
568,9 ± 40,3 |
325,6 ± 39,5 |
56,3 ± 6,5 |
39,4 ± 7,6 |
Р |
0,00002 |
0,00006 |
0,0008 |
0,0002 |
СИК (л = 16) |
739 ± 64,0 |
596,8 ± 121,5 |
78,9 ± 11,1 |
74,9 ± 8,2 |
Р |
0,00002 |
< 0,00001 |
0,00007 |
< 0,00001 |
Примечание. Fy — уровень F в 9 ч; FB — уровень F в 21 ч; (F^Fy) ■ 100% — показатель ритма секреции F; (FyFy) • 100% — показатель степени подавления F (отношение уровня F с 2 мг дексаметазона к уровню F в 9 ч). Здесь и в табл. 3: М — среднее значение; т — ошибка среднего; р — достоверность различий с контрольной группой.
Таблица 3. Содержание кортикостероидов в сыворотке крови у обследованных больных (М ± т) |
|||||||
№ п/п |
Группа обследованных |
Показатель, нг/мл |
F/E |
||||
F |
Е |
В |
DOC |
S |
|||
1 |
Контрольная (л = 25) |
63,6 ± 3,26 |
19,9 ± 1,05 |
3,8 ± 0,25 |
3,9 ± 0,44 |
1,4 ± 0,14 |
3,3 ± 0,17 |
2 |
Инциденталомы (группа А; п — 79) |
84,0 ± 5,15 |
23,1 ± 1,38 |
6,6 ± 0,72 |
7,2 ± 1,93 |
5,1 ± 0,78 |
4,2 ± 0,21 |
Р |
0,16 |
0,60 |
0,24 |
0,83 |
0,05 |
0,02 |
|
3 |
Инциденталомы (группа Б; п - 21) |
72,8 ± 10,76 |
23,6 ± 3,29 |
8,5 ± 2,73 |
27,3 ± 11,06 |
8,7 ± 2,16 |
3,4 ± 0,36 |
Р |
0,66 |
0,47 |
0,16 |
0,002 |
0,03 |
0,89 |
|
4 |
СИК (субклиническая форма; п = 35) |
108,4 ± 9,89 |
21,2 ± 3,72 |
7,1 ± 0,75 |
11,2 ± 2,20 |
9,2 ± 1,68 |
6,4 ± 0,95 |
Р |
< 0,0001 |
0,16 |
0,04 |
0,03 |
0,002 |
0,0005 |
|
5 |
СИК-ГГ (л = 24) |
192,5 ± 14,7 |
23,9 ± 2,07 |
15,0 ± 2,09 |
12,4 ± 2,07 |
10,7 ± 3,24 |
8,8 ± 0,61 |
Р |
< 0,0001 |
0,21 |
0,0004 |
0,07 |
0,01 |
< 0,0001 |
|
6 |
СИК-НГ (л = 16) |
134,9 ± 11,4 |
29,8 ± 3,5 |
23,9 ± 5,31 |
18,3 ± 4,61 |
17,6 ± 6,78 |
5,03 ± 0,38 |
Д |
< 0,0001 |
< 0,002 |
< 0,0001 |
0,002 |
< 0,0001 |
0,009 |
|
7 |
Адренокарциномы (л = 16) |
94,7 ± 3,99 |
26,6 ± 3,20 |
22,4 ± 6,51 |
20,7 ± 2,54 |
43,3 ± 6,4 |
4,4 ± 0,81 |
Р |
0,008 |
0,1 |
< 0,0001 |
0,004 |
< 0,0001 |
0,14 |
|
/>4-5 |
< 0,002 |
— |
< 0,01 |
— |
— |
— |
|
Р5-6 |
< 0,005 |
— |
< 0,02 |
— |
— |
< 0,0001 |
Субклинический СИК, диагностика которого представляет собой определенные трудности, по данным литературы, встречается в 12—16% при случайно выявленных новообразованиях [9]. Повышенная экскреция с мочой FF до 92,51 ± 13,69 мкг/с (р < 0,0001) и FE до 129,38 ± 14,27 мкг/с < 0,0001), повышенный уровень F, В и S в сыворотке крови, а также увеличение соотношений F/Е крови и FF/FE мочи до 0,75 ± 0,09 (р < 0,0001), качественные изменения стероидного профиля, характерные для СИК, выявленные нами у 25,9% больных с инциденталомами, могут указывать на субклинический СИГ у данных больных. При выявлении гормональных нарушений у пациентов с инциденталомами рекомендуется хирургическое лечение [4, 5].
У больных с СИК уровни F, В и S крови, экскреция FF и FE с мочой, а также соотношения F/E крови и FF/FE мочи достоверно выше, чем у больных с субклиническим СИК (см. табл. 3). У больных с СИК-ГГ соотношение F/Е крови достоверно выше, а уровень В и S достоверно ниже, чем у больных с СИК-НГ (см. табл. 3). Значительное увеличение уровня F крови и экскреции FF и FE с мочой, а также увеличение соотношения F/Е крови и FF/FE мочи, качественное изменение стероидного профиля являются признаками органического эндогенного гиперкортицизма по данным ВЭЖХ и могут быть использованы для его диагностики до проведения пробы с дексаметазоном.
Злокачественный характер новообразования надпочечника был верифицирован при гистологическом исследовании удаленной опухоли. У больных с адренокарциномой обнаружено значительное повышение концентрации S в крови по сравнению с таковой у пациентов с доброкачественными аденомами и увеличение, но в меньшей степени, уровня DOC. У некоторых пациентов с адренокарциномой содержание S достигало 79,2 нг/мл при норме до 1 нг/мл. Качественное изменение стероидного профиля в виде соединения между В и DOC может иметь дополнительное значение при оценке злокачественности образования.
Таким образом, определение количественного и качественного состава кортикостероидов в биологических жидкостях методом обращенно-фазовой ВЭЖХ у больных с заболеваниями гипофизарнонадпочечниковой системы дает возможность осуществить раннюю диагностику патологического процесса в надпочечниках, выработать дифференциально-диагностические критерии при различных опухолях, заподозрить злокачественный процесс в них, что значительно облегчает задачу эндокринологов и хирургов в отношении тактики лечения этих больных.
Выводы
- По данным ВЭЖХ признаками гормональной активности инциденталом (58,6%) являются нарушения стероидогенеза, характеризующиеся повышением экскреции свободного кортизола с мочой, уровня S в сыворотке крови, соотношений F/E крови и FF/FE мочи, качественные изменения стероидного профиля.
- Снижение экскреции FF с мочой и соотношения FF/FE мочи при увеличении уровня В, DOC и S крови, отмеченное у 15,5% больных с инциденталомами, качественные изменения стероидного профиля могут свидетельствовать о стертой форме ВГКН у данных больных.
- При органическом эндогенном гиперкорти- цизме по данным ВЭЖХ установлены повышение уровней F, В, S в сыворотке крови и экскреции FF и FE с мочой, повышение соотношения F/Е крови и FF/FE мочи, качественные изменения стероидного профиля.
- При СИК-ГГ увеличение уровня F и соотношения F/Е достоверно выше, чем при СИК-НГ. Высокие уровни В и S характерны для опухолевого поражения надпочечников.
- Значительное увеличение содержания S и DOC у больных с новообразованием надпочечников с большой вероятностью может указывать на злокачественный характер опухоли.
Список литературы
1. Великанова Л.И., Карцева Л.А., Бессонова Е.А. // Между-народная конф. по теоретическим вопросам адсорбции и адсорбционной хроматографии: Сборник тезисов докла-дов, 2001. - С. 55.
2. Гончаров Н.П., Кация Г.В., Колесникова Г.В. и др. // Пробл. эндокринол. - 2000. - Т. 46, № 5. - С. 21-25.
3. Синдром Иценко-Кушинга / Под ред. В. Г. Баранова. - М., 1988.
4. Angeli A., Osella G., Аli A., Terzolo М. // Horm. Res. - 1997. - Vol.47. - P. 279-283.
5. Chidiac R.M., Aron D.C. // Endocrinol. Metab. Clin. N. Am. - 1997. - Vol.26. - P. 233-253.
6. Mantero F., Terzolo M., Arnaldi G. et al. // J. Clin. Endocri-nol. Metab. - 1999. - Vol. 85. - P. 637-644.
7. Ozella G., Terzolo M., Boretta G. et al. // J. Clin. Endocrinol. Metab. - 1996. - Vol.79. - P. 1532-1539.
8. Reincke M., Peter M., Sippell W.G., Allolio B. // Eur. J. En-docrinol. - 1997. - Vol.136. - P. 196-200.
9. Rossi R., Tauchmanova L., Luciano A. et al. // J. Clin. Endo-crinol. Metab. - 1999. - Vol.85. - P. 1440-1448.
10. Schoneshofer M., Weber В., Oelkers W. et al. // Clin. Chem. - 1986. - Vol.32. - P. 93-96.
11. Suzuki Т., Sakuta H., Nakagawa K. et al. // Nippon Naibunpi Gakkai Zasshi. - 1993. - Vol.69. - P. 1139-1152.
12. Taylor R.L., Machacek D., Singh R.J. // Clin. Chem. - 2002. - Vol.48. - P. 1511-1519.
13. Turpeinen U., Stenman U.H. // Scand. J. Clin. Lab. Invest. - 2003. - Vol.63. - P. 143.
14. Ueshiba H., Segawa M., Hayashi T. et al. // Clin. Chem. - 1991. - Vol.37. - P. 1329-1333.
Об авторах
Л. И. ВеликановаСанкт-Петербургская медицинская академия последипломного образования
Россия
З. Р. Шафигуллина
Санкт-Петербургская медицинская академия последипломного образования
Россия
Н. В. Ворохобина
Санкт-Петербургская медицинская академия последипломного образования
Россия
П. А. Сильницкий
Санкт-Петербургская медицинская академия последипломного образования
Россия
Е. А. Бессонова
Санкт-Петербургская медицинская академия последипломного образования
Россия
Рецензия
Для цитирования:
Великанова Л.И., Шафигуллина З.Р., Ворохобина Н.В., Сильницкий П.А., Бессонова Е.А. Диагностическое значение высокоэффективной жидкостной хроматографии кортикостероидов при заболеваниях гипофизарно-надпочечниковой системы. Проблемы Эндокринологии. 2005;51(6):9-11.
For citation:
Velikanova L.I., Shafigullina Z.R., Vorokhobina N.V., Silnitsky P.A., Bessonova Ye.A. Diagnostic value of high performance liquid chromatography of corticosteroids in diseases of the pituitary system. Problems of Endocrinology. 2005;51(6):9-11. (In Russ.)