Перейти к:
Связь полиморфиз ма гена метилентетрагидрофолатредуктазы с развитием инфаркта миокарда у больных сахарным диабетом 2-го типа
Аннотация
С целью изучения частоты встречаемости полиморфного локуса С677Т гена метилентетрагидрофолатредуктазы (МТГФР) у больных сахарным диабетом (СД) 2-го типа и его связи с уровнем гомоцистеина (ГЦ) и развитием инфаркта миокарда обследованы 118 пациентов с СД 2-го типа с ишемической болезнью сердца (ИБС) и без ИБС в возрасте 45- 60 лет. Контрольную группу составили 89 человек (доноры крови). Выявлены статистически значимые различия частоты встречаемости аллелей Т677 и С677, локуса С677С между группами больных СД 2-го типа с ИБС и перенесенным инфарктом миокарда и здоровыми людьми. Установлено, что аллель Т677 гена МТГФР связан с повышенным риском развития инфаркта миокарда у пациентов с СД 2-го типа (OR = 1,879, р = 0,029). Сочетание локуса Т677Т гена МТГФР с гипергомоцистеинемией у больных СД 2-го типа с ИБС тесно связано с другими факторами риска сердечно-сосудистых заболеваний и может оказывать существенное влияние на течение ИБС.
Ключевые слова
Для цитирования:
Бондарь И.А., Алина А.Р., Воронина Е.Н. Связь полиморфиз ма гена метилентетрагидрофолатредуктазы с развитием инфаркта миокарда у больных сахарным диабетом 2-го типа. Проблемы Эндокринологии. 2007;53(4):3-6.
For citation:
Bandar I.A., Alina A.R., Voronina E.N. Association of methylenetetrahydrofolate reductase gene polymorphism with the development of myocardial infarction in patients with type 2 diabetes. Problems of Endocrinology. 2007;53(4):3-6. (In Russ.)
Наиболее частой причиной снижения качества и продолжительности жизни больных сахарным диабетом (СД) 2-го типа является сердечно-сосудистая патология. Риск развития ишемической болезни сердца (ИБС) у больных СД возрастает более чем в 2 раза, а частота инфаркта миокарда — в 3— 5 раз по сравнению с общей популяцией [1, 15].
Патогенез этих осложнений многофакторный и связан как с недостаточным метаболическим контролем СД, так и с иммунологическими и гормональными сдвигами, изменениями в системе гемостаза. В последние годы особое значение в патогенезе сердечно-сосудистых заболеваний (ССЗ) придается генетическим нарушениям [2—4].
В настоящее время ведутся интенсивные работы по изучению одного из генетических маркеров ССЗ — полиморфизма гена 5,10-метилентетрагидрофо- латредуктазы (МТГФР) и его роли в формировании этой патологии. При полиморфизме гена МТГФР происходит замена цитозина на тимин в 677-м нуклеотиде (С677Т), в результате этого фермент оказывается термолабильным и его активность снижается на 30—65%. Последнее приводит к нарушению процессов реметилирования гомоцистеина (ГЦ) в метионин и развитию гипергомоцистеинемии [2, 4].
По данным многочисленных исследований при гомозиготном генотипе (Т677Т) гена МТГФР уровень ГЦ выше, чем при гомозиготном (С677С) и гетерозиготном генотипе (С677Т). Считается, что гомозиготный генотип Т677Т может быть фактором риска развития атеросклероза [7, 8].
Цель исследования: изучить частоту встречаемости полиморфизма гена МТГФР (С677Т) у больных СД 2-го типа и его связь с уровнем ГЦ и развитием инфаркта миокарда.
Материалы и методы
Генетический материал получен и проанализирован у 118 больных СД 2-го типа в возрасте от 45 до 60 лет. Продолжительность заболевания в среднем составила 7,8 ± 5,7 года. Для оценки влияния полиморфизма гена МТГФР на развитие ИБС больных разделили на 2 группы. В 1-ю группу вошли 69 больных СД 2-го типа с ИБС, средний возраст 53,6 ± 4,4 года, в этой группе у 42 человек (у 18 мужчин и 24 женщин) в анамнезе был инфаркт миокарда, средний возраст 53,7 ± 7,5 года.
2-ю группу составили 49 больных СД 2-го типа без ИБС (15 мужчин и 34 женщины), средний возраст 52,1 ± 4,3 года.
Критерии исключения из 1-й и 2-й групп: возраст пациента до 45 лет и старше 60 лет; наличие у пациента хронической почечной недостаточности, обострения сопутствующих хронических заболеваний, гнойно-некротических осложнений, В|2-фо- лиеводефицитной анемии, а также лечение фолиевой кислотой или витаминами группы В в течение последнего месяца.
В контрольную группу вошли 89 человек (доноры крови) в возрасте от 45 до 60 лет без нарушений углеводного обмена и атеротромботических проявлений в анамнезе.
Всем больным проводили полное клинико-лабораторное обследование. ИБС выявляли холтеровским мониторированием ЭКГ на аппарате Market! HELLIGE и тредмилметрией на аппарате HEL- LIGE CardioSoft V3.0.
Уровень ГЦ определяли иммуноферментным методом на анализаторе закрытого типа IMMU- LITE 2000 наборами Homocysteine (AXSIS) с использованием реактивов фирмы-производителя (ОРС, США) в Новосибирском НИИ туберкулеза М3 РФ, ООО "Лабораторная диагностика" (зав. лабораторией — канд. мед. наук В. В. Романов).
Исследуемым материалом для молекулярно-генетического анализа служили соскобы буккальных эпителиальных клеток. ДНК выделяли методом фенол-хлороформной экстракции. Полиморфные участки амплифицировали с помощью полимеразной цепной реакции на амплификаторе "Ерреп- dorff”, использовали праймеры, синтезированные в Институте химической биологии и фундаментальной медицины (ИХБФМ) СО РАН. Исследование проводила группа фармакогеномики ИХБФМ СО РАН (руководитель — канд. биол. наук М. Л. Филипенко).
Статистический анализ проводили с применением пакетов прикладных программ "Биостат" и "Statistica 6.0". Все данные приведены в виде средних арифметических значений и их стандартного отклонения (Л/ ± SD). Соответствие распределения аллелей и генотипов равновесию Харди- Вайнберга проверяли по критерию согласия Пирсона. Достоверность коэффициентов различий принимали при значении р < 0,05. Для оценки ассоциаций полиморфных вариантов генов с патологическим фенотипом рассчитывали относительный риск (OR — odds ratio) по формуле:
OR = а • d/b • с,
где а — частота анализируемого аллеля у больных; b — частота анализируемого аллеля в контрольной выборке; с и d — суммарная частота остальных аллелей у больных и в контрольной группе соответственно. При OR = 1 ассоциация отсутствовала, при OR > 1 имела место положительная ассоциация аллеля с заболеванием ("фактор риска"), при OR < 1 — отрицательная ассоциация аллеля с заболеванием, протективное действие данного аллеля.
Исследование выполнено в соответствии с Хельсинкской декларацией Всемирной ассоциации "Этические принципы проведения научных медицинских исследований с участием человека" с поправками 2000 г. Пациенты давали письменное информированное согласие на участие в исследовании.
Результаты и их обсуждение
В данном исследовании анализ полиморфизма гена МТГФР у больных СД 2-го типа выявил преобладание нормального аллеля С677, который определялся у 75,4% пациентов. При этом аллель Т677, который в некоторых исследованиях зарекомендовал себя как маркер ССЗ [8, 9], отмечался у 24,6% больных СД 2-го типа и у 21,9% лиц контрольной группы (OR = 1,161, С. I. = [0,731 — 1,844], х2 = 0,40, р = 0,52) (табл. 1). Частота встречаемости генотипов соответствовала закону Харди-Вайнберга (см. табл. 1). У 35,6% обследуемых больных СД 2-го типа встречался гетерозиготный генотип С677Т, у 57,6% — гомозиготный (нормальный) генотип С677С, у 6,8% больных — гомозиготный генотип Т677Т. Статистически значимое различие в частотах встречаемости генотипов С677С, С677Т и Т677Т между больными СД 2-го типа и контрольной группой не выявлено (см. табл. 1). При расчете стратификационного риска получена некоторая ассоциация СД 2-го типа с аллелем Т677 (OR = 1,1), гомозиготным генотипом Т677Т (OR =1,2) и гетерозиготным генотипом С677Т (OR = 1,1), однако данная ассоциация не являлась достоверной.
Существуют данные о более высоком риске развития ИБС у людей с гомозиготным генотипом Т677Т [4, 6].
Среди задач данного исследования было изучение полиморфизма гена МТГФР как одного из факторов, влияющих на обмен ГЦ и на развитие ИБС. По результатам исследования у больных с ИБС были достоверно выше следующие показатели: длительность течения СД и артериальной гипертонии (АГ), уровень гликемии натощак и после еды, уровень гликозилированного гемоглобина (НЬА1С). Также при наличии ИБС зарегистрированы более высокие уровни общего холестерина (ОХС), триглицеридов (ТГ), липопротеидов низкой плотности (ЛПНП) и сниженные показатели липопротеидов высокой плотности (ЛПВП) (табл. 2). Полученные результаты не противоречат данным литературы, повышенный уровень указанных показателей у пациентов с СД сопровождается возрастанием риска ССЗ [10, 13].
Таблица 1
Частота встречаемости аллелей и генотипов полиморфного локуса С677Т гена МТГФР у больных СД 2-го типа и в контрольной группе
Выборка |
Аллель, п (%) |
Генотип, п (%) |
Соответствие закону Харди— Вайнберга (X2, #= 1), р |
|||
С677 |
Т677 |
С677С |
С677Т |
Т677Т |
||
Больные СД 2-го типа (л = 118) |
178 (75,4) |
58 (24,6) |
68 (57,6) |
42 (35,6) |
8 (6,8) |
0,664651 |
Контрольная группа (п = 89) |
139 (78,1) |
39 (21,9) |
55 (61,8) |
29 (32,6) |
5 (5,6) |
0,652185 |
Таблица 2
Клинико-лабораторная характеристика больных СД 2-го типа с ИБС и без ИБС
Показатель |
СД 2-го типа с ИБС |
СД 2-го типа без ИБС |
Длительность СД, годы |
8,7 ± 5,9 |
6,5 ± 5,2* |
Длительность АГ, годы |
10,3 ± 5,7 |
7,5 ± 5,3* |
Гликемия натощак, ммоль/л |
8,3 ± 1,8 |
7,2 ± 1,4* |
Постпрандиальная гликемия, мммоль/л |
11,2 ± 1,9 |
8,7 ± 2,04* |
Среднесуточная гликемия, мммоль/л |
9,8 ± 1,7 |
7,7 ± 1,4* |
НЬАк, % |
10,2 ± 1,9 |
8,9 ± 2,2* |
ОХС, мммоль/л |
6,4 ± 1,3 |
5,4 ± 1,0* |
ТГ, ммоль/л |
2,8 ± 1,2 |
1,9 ± 0,9* |
ХС ЛПВП, мммоль/л |
1,11 ± 0,22 |
1,28 ± 0,14* |
ХС ЛПНП, мммоль/л |
4,0 ± 1,3 |
3,3 ± 0,9* |
КА, ЕД |
5,4 ± 1,3 |
4,4 ± 0,9* |
Примечание. КА — коэффициент атерогенности. ♦ — достоверность различий между группами, р < 0,05.
- A. Engbersen и соавт. [8], A. Gardemann и соавт. [9] выявили наличие ассоциации гомозиготного генотипа Т677Т гена МТГФР с ССЗ [8, 9]. Другие исследователи не обнаружили связи между данным полиморфизмом и сосудистой патологией [4, 7].
В нашем исследовании частота аллеля Т677 гена МТГФР у больных СД 2-го типа с ИБС и без ИБС достоверно не отличалась и составила 26,8 и 21,4% соответственно (табл. 3).
При анализе распределения генотипов гена МТГФР у 7,3% больных СД 2-го типа с ИБС и у 6,1% пациентов без ИБС выявлено наличие гомозиготного (Т677Т) генотипа МТГФР (см. табл. 3). Гетерозиготный генотип С677Т преобладал у больных 1-й группы (с СД 2-го типа и ИБС), по сравнению с больными 2-й группы (с СД 2-го типа без ИБС) — 39,1 и 30,6% случаев соответственно. При расчете стратификационного риска выявлена некоторая ассоциация СД 2-го типа в сочетании с ИБС с аллелем Т677 (OR = 1,3), гомозиготным генотипом Т677Т (OR = 1,4) и гетерозиготным генотипом С677Т (OR = 1,3), однако данная ассоциация не являлась достоверной. Аналогичные данные описаны и другими авторами. В группе французских, шведских и австралийских больных с ССЗ также не выявлена ассоциация аллеля Т677 и генотипа Т677Т гена МТГФР с атеросклеротическим поражением коронарных артерий [6, 7, 14].
В исследованиях японских ученых выявлена высокая частота аллеля Т677 у больных с повторными инфарктами миокарда и корреляция данного аллеля с уровнем ГЦ в сыворотке крови [11, 12]. В исследовании A. Gardemann и соавт., опубликованном в 1999 г., был проанализирован полиморфизм С677Т гена МТГФР почти у 2500 европейцев с ангиографически верифицированным атеросклерозом коронарных артерий. Авторы отмечали, что носители гомозиготного генотипа Т677Т имеют более высокий показатель атеросклеротического поражения коронарных артерий, чем лица, несущие хотя бы 1 аллель С677 [9].
В связи с этим был проведен анализ полиморфизма гена МТГФР у больных СД 2-го типа с ИБС в зависимости от наличия или отсутствия в анамнезе инфаркта миокарда. Пациенты с СД 2-го типа с инфарктом миокарда в анамнезе отличались от контрольной группы по частоте встречаемости аллеля Т677 (OR = 1,879, С. I. = [1,059-3,333], х2 = 4,72, р = 0,029) и С677 (OR = 0,532, С. I. = [0,3000,944], х2 = 4,72, р = 0,029). У больных с перенесенным инфарктом миокарда реже, чем в контрольной группе, наблюдался гомозиготный генотип С677С (OR = 0,420, С. I. [0,199-0,890], х2 = 5,24, р = 0,022). Обнаружена также высокая частота генотипа С677Т и Т677Т (50 и 9,5% соответственно) в этой группе больных по сравнению с контрольной группой (32,6 и 5,6% соответственно), но данное различие носило недостоверный характер (табл. 4). Носители аллеля Т677 имели повышенный риск развития инфаркта миокарда (OR = 1,879, С. I. = [1,059-3,333], X2 = 4,72, р = 0,029).
. Таблица 3
Частота встречаемости аллелей и генотипов полиморфного локуса С677Т гена МТГФР у больных СД 2-го типа с ИБС и без ИБС
Аллель, п (%) |
Генотип, л (%) |
Соответствие закону Харди— Вайнберга (xU/= D.P |
||||
Выборка |
С677 |
Т677 |
С677С |
С677Т |
Т677Т |
|
Больные СД 2-го типа с ИБС (л = 69) 101 (73,2) 37 (26,8) 37 (53,6) 27 (39,1) 5 (7,3) 0,980493
Больные СД 2-го типа без ИБС (л = 49) 77 (78,6) 21 (21,4) 31 (63,3) 15 (30,6) 3 (6,1) 0,524539
Таблица 4
Частота встречаемости аллелей и генотипов полиморфного локуса С677Т гена МТГФР у больных СД 2-го типа с ИБС и перенесенным инфарктом миокарда, с ИБС без инфаркта миокарда и без ИБС
Аллель |
, л(%) |
Генотип, л (%) |
Соответствие закону Харди— Вайнберга (Х!, df= 1), р |
|||
Выборка |
С677 |
Т677 |
С677С |
С677Т |
Т677Т |
|
Больные СД 2-го типа с ИБС и инфарк-
том миокарда (л = 42) |
55 (65,5) |
29 (34,5) |
17 (40,5) |
21 (50,0) |
4 (9,5) |
0,492288 |
Больные СД 2-го типа с ИБС и без ин |
||||||
фаркта миокарда (л = 27) |
46 (85,2) |
8 (14,8) |
20 (74,1) |
6 (22,2) |
1 (3,7) |
0,534416 |
Больные СД 2-го типа без ИБС (л = 49) |
77 (78,6) |
21 (21,4) |
31 (63,3) |
15 (30,6) |
3(6,1) |
0,524539 |
Контрольная группа (л = 89) |
139 (78,1) |
39 (21,9) |
55 (61,8) |
29 (32,6) |
5 (5,6) |
0,652185 |
Таблица 5
Полиморфный локус (С677Т) гена МТГФР и уровень ГЦ в сыворотке крови у больных СД 2-го типа и в контрольной группе
Параметр |
Контрольная группа |
СД 2-го типа с ИБС |
СД 2-го типа без ИБС |
гц, ммоль/л |
|||
МТГФР C677C |
8,8 ± 1,8 |
13,2 ± 3,9* |
11,2 ± 4,6* |
МТГФР C677T |
10,4 ± 2,3 |
14,5 ± 6,5 |
12,1 ± 4,7 |
МТГФР Т677Т |
12,5 |
15,8 ± 4,1 |
13,8 ± 7,5 |
Примечание. *— достоверность различий с контрольной группой, р < 0,05.
У больных с инфарктом миокарда в анамнезе частота встречаемости полиморфизма гена МТГФР была выше по сравнению не только со здоровыми людьми, но и с пациентами с СД без ИБС и с ИБС, но без инфаркта миокарда. Так, аллель Т677 определялся у 34,5% больных с инфарктом миокарда, у 14,8% больных без перенесенного инфаркта миокарда и у 21,4% больных без ИБС (х2 = 7,78, р = 0,02) (см. табл. 4). В группе пациентов с СД 2-го типа и перенесенным инфарктом миокарда обнаружено преобладание гетерозиготного С677Т (х2 = 6,43, р - 0,04) и гомозиготного Т677Т (х2 = 0,93, р = 0,62) генотипа по сравнению с пациентами с СД 2-го типа с ИБС и без инфаркта миокарда и СД 2-го типа без ИБС (см. табл. 4).
Известно, что полиморфизм гена МТГФР может быть одной из причин повышения ГЦ. У больных СД 2-го типа отмечались более высокие значения ГЦ, чем у лиц контрольной группы: 14,0 ± 5,2 ммоль/л при наличии СД 2-го типа и ИБС (р = 0,001), 11,6 ± 4,8 ммоль/л при СД и отсутствии ИБС и 9,38 ± 5,4 ммоль/л в контрольной группе. При распределении результатов исследования ГЦ в зависимости от полиморфизма гена МТГФР оказалось, что и у здоровых людей, и у больных СД (в 1-й и 2-й группах) наибольший уровень ГЦ выявлен при гомозиготном генотипе Т677Т (табл. 5). У пациентов с инфарктом миокарда в анамнезе при гомозиготном и гетерозиготном генотипе Т677Т и С677Т выявлены наибольшие значения ГЦ (табл. 6). Аналогичные результаты были отмечены также в работах японских ученых. К. Arai и соавт. получили данные о том, что уровень ГЦ выше у больных СД 2-го типа с Т677Т-геноти- пом гена МТГФР, чем у обследованных с С677С генотипом. Также в группе больных СД 2-го типа с Т677Т-генотипом выявлена высокая частота инфаркта миокарда. Таким образом, авторы пришли к выводу, что Т677Т-генотип гена МТГФР опосредованно, через умеренную гипергомоцистеинемию усиливает атеросклероз у больных СД 2-го типа и повышает риск инфаркта миокарда [5].
При проведении многофакторного регрессионного анализа уровня ГЦ у больных СД 2-го типа с ИБС и инфарктом миокарда в анамнезе и гомозиготным генотипом Т677Т с другими факторами риска ИБС, где в качестве независимых переменных в модели выступали длительность СД и АГ, уровень систолического и диастолического АД, гликемия натощак и после еды, НЬА1С, ОХС, ТГ, ЛПВП, ЛПНП, а в качестве зависимого — концентрация ГЦ, оказалось, что уровень ГЦ у больных с гомозиготным генотипом Т677Т зависел от гликемии натощак, среднесуточной гликемии, НЬА|С, ЛПВП, ТГ (R2 = 0,99; р = 0,014).
Таблица 6
Полиморфный локус С677Т гена МТГФР и уровень ГЦ в сыворотке крови у больных СД 2-го типа с ИБС и инфарктом миокарда и без него
Параметр |
СД 2-го типа с ИБС и перенесенным инфарктом миокарда |
СД 2-го типа с ИБС без инфаркта миокарда |
ГЦ, MN |
<оль/л |
|
МТГФР С677С |
13,7 ± 4,2 |
12,1 ± 3,3 |
МТГФР С677Т |
14,5 ± 4,7 |
13,8 ± 4,8 |
МТГФР Т677Т |
16,9 ± 3,8 |
11,2 |
Таким образом, повышенный уровень ГЦ при гомозиготном генотипе Т677Т гена МТГФР может являться важным фактором в развитии инфаркта миокарда при СД.
Выводы
- Частота встречаемости аллелей и генотипов С677Т гена МТГФР у больных СД 2-го типа без ИБС и с ИБС, но без инфаркта миокарда в анамнезе соответствовали показателям в контрольной группе.
- Пациенты с СД 2-го типа с инфарктом миокарда в анамнезе отличались от контрольной группы по частоте встречаемости аллелей Т677 и С677 гена МТГФР (р = 0,029). Аллель Т677 гена МТГФР связана с повышенным риском развития инфаркта миокарда у больных СД 2-го типа (OR = 1,879, р = 0,029).
- Сочетание гомозиготного генотипа Т677Т гена МТГФР с гипергомоцистеинемией у больных СД 2-го типа с ИБС и инфарктом миокарда в анамнезе тесно связано с другими факторами риска ССЗ (НЬА,С, гликемия натощак, гипертриглицеридемия, низкий уровень ЛПВП) и может оказывать влияние на течение ИБС и инфаркта миокарда.
Список литературы
1. Александров А. А. // Consilium Medicum. - 2001. - № 10. -С. 464-468.
2. Баранов В. С, Асеев М. В., Баранова Е. В. II Природа. - 1999. - № 3. - С. 5-8.
3. Котельников М. В. // Кардиология. - 2004. - № 10. - С. 102-106.
4. Спиридонова М. Г., Степанов В. А., Пузырев В. П. // Клин. мед. - 2001. -№ 2. - С. 11-16.
5. Aral К., Jamasaki J., Kajimoto J. et al. // Diabetes. - 1997. - Vol. 12. - P. 2102-2104.
6. Brattstrom L., Wilcken D., Whrvik J., Brudin L. // Circulation. -1998. - Vol. 98. - P. 2520-2526.
7. Brulhart M.-C, Dussoix Ph., Puiz J. et al. // Am. J. Hum. Genet. - 1997. - Vol. 60. - P. 228-229.
8. Engbersen A., Franken D., Boers G. et al. // Am. J. Hum. Genet. - 1995. - Vol. 56. - P. 142-150.
9. Gardemann A., Weidemann Н., Philipp M. et al. // Eur. Heart J. - 1999. - Vol. 20. - P. 584-592.
10. Hoogeven E. K., Kostense P. J., Jakobs С. // Circulation. - 2000. - Vol. 5. - P. 1506-1511.
11. Kluijtmans L., van den Heuvel L., Boers G. et al. // Ibid. - 1998. - Vol. 43. - P. 414-421.
12. Morita H., Kurihara H., Tsubaki S. et al. // Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol. - 1998. - Vol. 18. - P. 1465-1469.
13. Turner R., Millns H., Neil H. et al. // Br. Med. J. - 1998. -Vol. 316. - P. 832-828.
14. Wilcken D., Wang X., Sim A., McCredie A // Arterioscl. Thromb. Vasc. Biol. - 1996. - Vol. 16. - P. 878-882.
15. Wotherspoon F., Laight D., Shaw K., Cummings M. // Br. J. Diabet. Vasc. Dis. - 2003. - Vol. 3. - P. 334-340.
Об авторах
И. А. БондарьНовосибирский государственный медицинский университет
Россия
А. Р. Алина
Новосибирский государственный медицинский университет
Россия
Е. Н. Воронина
Институт химической биологии и фундаментальной медицины СО РАН
Россия
Рецензия
Для цитирования:
Бондарь И.А., Алина А.Р., Воронина Е.Н. Связь полиморфиз ма гена метилентетрагидрофолатредуктазы с развитием инфаркта миокарда у больных сахарным диабетом 2-го типа. Проблемы Эндокринологии. 2007;53(4):3-6.
For citation:
Bandar I.A., Alina A.R., Voronina E.N. Association of methylenetetrahydrofolate reductase gene polymorphism with the development of myocardial infarction in patients with type 2 diabetes. Problems of Endocrinology. 2007;53(4):3-6. (In Russ.)