Влияние хорионического гонадотропина на формирование вторичного иммунного ответа

Хорионический гонадотропин (ХГ), синтезируемый плацентой человека, контролирует гормональные механизмы роста и развития фето- плацентраного комплекса с момента имплантации яйцеклетки до самых родов [1]. Полуаллоген- ный плод и плацента распознаются лимфоцитами матери как чужеродный антигенный материал, но в силу ряда причин не отторгаются ими [4]. Важную роль в этом играют гормоны беременности, оказывающие мощное иммунодепрессивное действие [5].

ХГ — наиболее активный модулятор иммунных реакций. Показано, что гормон дозозависимо угнетает реакции клеточного [7, 11] и гуморального [2, 9] звеньев иммунного ответа. Однако эти сведения, как правило, относятся лишь к влиянию ХГ на первичный ответ иммунокомпетентных клеток. Взаимоотношение иммунной системы матери с фето-плацентарным комплексом включает в себя не только первичный, но и вторичный, т. е. анамнестический, иммунный ответ, который приобретает доминирующее значение при повторных беременностях. Именно реакции вторичного типа приводят к таким грозным заболеваниям, как гемолитическая болезнь новорожденных, невынашивание и прочие иммунопатологические состояния, осложняющие течение беременности [3].

Целью настоящей работы было исследование иммуномодулирующих эффектов ХГ и половых стероидов яичников как его возможных посредников на процессы формирования анамнестического иммунного ответа.

Материалы и методы

Исследования проводились на мышах-самках линии СВА массой 18—22 г, полученных из питомника лаборатории животных РАМН «Рапполово>. У части животных производилась операция двусторонней овариэктомии под эфирным наркозом. Такие мыши использовались в эксперименте после 1 мес реабилитации.

Схема индукции вторичного иммунного ответа включала в себя два этапа: 1-й этап — животных интраперитонеально иммунизировали эритроцитами барана (ЭБ) в дозе 2-10® клеток, 2-й этап — через 20 сут мышей вновь подвергали интраперитонеальной иммунизации такой же дозой ЭБ. Уровень вторичного иммунного ответа оценивался на 5-е сутки после реиммунизации методом локального гемолиза в геле агарозы по Ерне |8|. Определение антителообразующих клеток (АОК), продуцирующих IgG, проводили непрямым методом Ерне в модификации [6]. Для этого использовали предварительно оттитрованную антисыворотку кролика против IgG мыши («Д1агностикум») в разведении 1:200.

ХГ («Profasi», Serano, Италия) инъецировался подкожно на следующий день после повторной иммунизации и через 1 день, т. е. на 1-е и 3-и сутки формирования анамнестического ответа. Гормон использовали в двух дозах, экстраполированных со средних концентраций ХГ в сыворотке крови беременных женщин в 1 и II—III триместрах, которые составили соответственно 200 и 40 ME [12]. Для исключения опосредованности иммуномодулирующих эффектов ХГ через половые стероиды яичников использовали не только овариэктомированных самок, но и непосредственное воздействие гормона in vitro на клетки селезенки. Для этого использовали некастрированных мышей-самок, у которых был индуцирован только первичный иммунный ответ. Таких доноров забивали на 20-е сутки от момента первичной иммунизации и асептично полученные клетки селезенки инкубировали в течение 1 ч в термостате (37 °C) в питательной среде 199 с ХГ (40 или 200 ME на культуру). Использовали вариант макрокультуры — 2-10⁷ ядросодержащих клеток (ЯСК) селезенки в 4 мл среды 199. Контролем служили спленоциты, инкубированные в питательной среде без гормона. После одночасовой инкубации клетки отмывали средой 199 и концентрировали таким образом, чтобы в 0,5 мл среды содержалось 2-10’ ЯСК. Затем эти клетки совместно с ЭБ (2-10®) переносили в хвостовую вену летально облученных (219,3 мКл/кг) сингенных мышей-реципиентов. Адоптивный вторичный иммунный ответ оценивали аналогично описанному выше. Жизнеспособность спленоцитов после культивирования, оцениваемая с помощью трипанового синего, составляла от 92 до 98 %.

Таким образом в экспериментах, проводимых в условиях культуры клеток, не только исключалась опосредованность иммуномодулирующего действия ХГ, но и оценивался эффект гормона на клетки, которые еще не получили второй антигенный сигнал.

Полученные данные подвергали статистической обработке с помощью критерия / Стьюдента. Во всех расчетах оперировали logio (lg) числа АОК.

Результаты и их обсуждение

Введение ХГ некастрированным мышам-самкам не оказывает статистически значимого влияния на уровень М- и G-АОК. В то же время инъекции высокой дозы (200 ME) ХГ достоверно угнетают количество ЯСК в селезенке (табл. 1). Соотношение М- и G-антителопродуцентов практически не изменяется, оставаясь постоянным — 1/10.

Овариэктомия практически не влияет на уровень М- и G-АОК, определяющих вторичный иммунный ответ. Клеточность селезенки также не изменяется. Введение ХГ в дозе, соответствующей концентрации гормона во II—III триместре беременности (40 ME), не в состоянии оказать какого-либо действия на процессы формирования анамнестического иммунного ответа (см. табл. 1). Сопоставление результатов, полученных у некастрированных животных, с результатами у овариэктомированных мышей также не выявило статистически достоверной разницы. По-видимо- му, ХГ в данной дозе не опосредует свои иммуномодулирующие эффекты через половые стероиды, как при действии на процессы формирования первичного иммунного ответа [2].

Таблица I

Влияние ХГ на уровень вторичного иммунного ответа у некастрированных и овариэктомированных животных (М±т)

Примечание. Здесь и в табл. 2 — в качестве контроля использовали животных, которым инъецировали растворитель гормона — стерильный физиологический раствор; п — количество животных в группе; в скобках — абсолютное число АОК.

В дозе, экстраполированной с максимальной концентрации гормона в период беременности (7— 10 нед), ХГ, инъецируемый овариэктомированным животным, статистически достоверно угнетает не только клеточность селезенки, но и вторичный иммунный ответ. Следует отметить, что в данном случае угнетение АОК избирательно и связано лишь с G-антителопродуцентами. М-АОК не подвергаются иммунодепрессивному воздействию высокой дозы ХГ (см. табл. 1). Статистически достоверная разница в количестве G-АОК, формирующихся под влиянием 40 и 200 ME ХГ, свидетельствует о дозозависимости иммуносупрессивного эффекта гормона. Разницы между ова- риэктомированными и некастрированными животными, как и в случае с дозой 40 ME, не выявлено.

Таким образом, можно констатировать иммунодепрессивный эффект высокой дозы ХГ, избирательно угнетающей процессы формирования G-AOK — основных антителопродуцентов анамне-

Таблица 2

Влияние ХГ in vitro на способность спленоцнтов формировать адоптивный вторичный иммунный ответ (Л1±т)

стического иммунного ответа. Не исключено, что подобный эффект зависит от способности гормона в этой дозе снижать клеточность селезенки. Помимо этого, необходимо отметить неспособность половых стероидов, чей синтез индуцируется ХГ [1], влиять на процессы формирования вторичного иммунного ответа.

Внесение гормона в культуру клеток селезенки в дозе 40 ME не оказывает значимого влияния на уровень М-АОК или G-АОК, формирующихся у облученных реципиентов. В то же время в дозе 200 ME ХГ достоверно угнетает способность иммунных спленоцитов формировать при вторичном контакте с антигеном анамнестический иммунный ответ. Однако в отличие от экспериментальной модели in vivo ХГ угнетает М-антителопродуценты in vitro (табл. 2). Это, по всей видимости, связано только с уровнем активации предшественников АОК (ПАОК). Если, в первой серии экспериментов ХГ воздействовал на ПАОК после их повторного контакта с антигеном, то в экспериментах in vitro гормон контактировал с клетками памяти, которые были сенсибилизированы, но не активированы антигеном. Из этого можно заключить, что ХГ-зависи- мая иммунодепрессия ассоциирована не только с дозой гормона, но и с уровнем активации лимфоидных клеток. Антиген, по-видимому, способен селекционировать иммунокомпетентные клетки для регуляторного действия ХГ.

Таким образом, можно говорить о реальной иммуносупрессии вторичного ответа гормоном беременности как на этапе сенсибилизации, так и на этапе формирования антителопродуцентов, но лишь в период его максимальной секреции — 7—10 нед. С позиции физиологии беременности данный эффект гормона и ограничение его по времени оправданны, так как именно в этот -период на клетках плода экспрессируются антигены главного комплекса гистосовместимости (HLA) [10]. Однако, если говорить о патологической беременности, как в случае с гемолитической болезнью новорожденных, то простое сопоставление сроков появления фетальных эритроцитов в кровоток матери (15 нед беременности [3]) показывает, что процессы формирования вторичного иммунного ответа выходят за временные рамки действия высокой дозы ХГ. Можно предполагать, что такое несоответствие способствует при определенных условиях развитию иммунопатологического процесса.

Выводы

1. ХГ оказывает угнетающее действие на процессы формирования вторичного иммунного ответа в дозе, соответствующей его концентрации в 7— 10 нед беременности (200 ME).
2. ХГ (200 ME) способен избирательно угнетать либо М-АОК, либо G-АОК- Такая селективность зависит от времени воздействия гормона относительно момента повторной иммунизации.
3. ХГ (200 ME) снижает клеточность селезенки, на территории которой формируются АОК при вторичном иммунном ответе.

Иммуномодулирующее влияние ХГ на процессы формирования вторичного иммунного ответа не зависит от половых стероидов яичников.